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生物标本的固定与脱水是病理学、组织学及生物学研究中基础且至关重要的技术环节,其质量直接决定了后续切片、染色乃至诊断与科研结果的成败。河南永纵科教为您讲述固定与脱水核心实操技巧与规范。
一、固定:
固定其目的是立即终止细胞自溶与细菌腐败,并尽可能保存细胞原有的形态、结构和化学成分。
组织离体后,必须在30分钟内开始固定,越快越好。延迟固定会导致组织自溶,细胞结构破坏。
液量是保障:固定液的体积必须达到标本体积的5-10倍以上,确保组织被完全浸没。对于无法完全浸没的大标本,应用浸有固定液的脱脂棉或纱布覆盖暴露部分,防止风干。
时间把控:常规固定时间为12-24小时。时间过短固定不彻底;时间过长可能产生酸性物质影响核染色,或形成福尔马林色素。
操作要点与技巧
组织块大小:组织块不宜过厚过大,否则固定液无法有效渗透中心区域。
规范取材:取材时使用锋利的刀剪,避免拉、锯、压等动作造成组织挤压伤。对于空腔器官,应剪开铺平后再固定,以利于固定液渗透。
固定液选择:10%中性缓冲福尔马林是常用的通用固定液,其渗透力强,组织收缩小,且能较好保存抗原。
特殊标本处理:
微小或易碎组织:应使用擦镜纸包裹后再进行固定和脱水,以防丢失。
肾穿刺等珍贵小标本:取得后立即用生理盐水冲洗,在解剖显微镜下辨别皮质与髓质,迅速切开并分别放入光镜和电镜固定液中,置于冰瓶内保存。

二、脱水:
固定并水洗后,组织中含有大量水分,而水与后续的透明剂不相溶,因此必须通过脱水剂将水分置换出来。
脱水应从低浓度酒精开始,逐步升至纯酒精。直接放入高浓度酒精会导致组织剧烈收缩、变脆。
脱水时间依据组织大小、类型而定。在低浓度酒精中时间可稍长,以确保水分被充分置换;在高浓度或纯酒精中时间不宜过长,否则组织会过度硬化变脆,影响切片。
操作要点与技巧
脱水剂选择:乙醇是常用的脱水剂。丙酮脱水能力更强、更快,但渗透性稍差,易使组织扭曲,多用于快速脱水或特殊要求。
脱水环境:脱水过程应在有盖的容器中进行,防止空气中水分进入和酒精挥发。
脱水不足的补救:如果脱水不彻底,在后续透明步骤中液体会出现白色浑浊。此时应将组织退回至纯酒精中重新脱水。
特殊组织处理:对于肺脏等含气器官,在脱水前及每次更换脱水剂时,都需要用注射器向气管或组织内灌注相应的脱水剂,以确保内部充分脱水。
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