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生物切片制作因材料不同有差异,但主要步骤通常包含取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片、贴片、染色、封片,以下为你展开介绍:
取材:选取新鲜、有代表性且结构典型的生物材料,材料要小而薄,大小一般以不超过0.5cm×0.5cm×0.3cm为宜。如植物根尖、叶片,动物肝脏、肌肉等。
固定:将取材材料立即投入固定液,目的是迅速杀死细胞,使细胞形态和结构保持生前状态,同时增强组织硬度,便于后续处理。
脱水:用梯度酒精等脱水剂除去组织内水分,使组织变硬,利于后续透明和浸蜡。
透明:脱水后组织内残留酒精会影响浸蜡,需用透明剂置换出酒精。
浸蜡:把透明后的组织放入熔化的石蜡中,使石蜡逐渐浸入组织,取代透明剂,为包埋做准备。通常先在低熔点石蜡中处理,再转入高熔点石蜡,每个阶段处理时间约1-3小时。

包埋:将浸好蜡的组织块放入包埋模具,倒入熔化的石蜡,迅速放入冷水中使其凝固,形成包含组织的蜡块。
切片:用切片机将蜡块切成薄片,厚度一般为4-10微米。切片过程中要保证切片连续、均匀且薄厚一致。
展片:用镊子将切好的切片捞到载玻片上的水滴中,借助水的表面张力使切片平整展开。
贴片:将展好的切片通过加热等方式使水分蒸发,让切片牢固附着在载玻片上。
染色:为使细胞和组织的结构更清晰,需用染料进行染色。
封片:染色后用封片剂将盖玻片封在载玻片上,防止切片干燥和外界污染,便于长期保存和观察。
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